李轲反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技术被广泛应用于人和动物的多种传染病早期诊断。笔者一直从事实验室动物疫病检测工作，现就应用RT-PCR实验方法过程中出现的一些常见污染问题做如下论述，仅共同行参考和探讨。RT-PCR实验有三步：提取RNA、反转录（RT）、PCR扩增及扩增产...

辅助方案：胶原酶消化制备脾脏细胞悬液实验材料：1.4000U/ml胶原酶D，融化后置于冰上2.HBSS，已灭菌，含Ca+、Mg2+（购置于LifeTechnologies）3.小鼠脾脏4.皮下注射针，22G×11/2in内径（BectonDickinson）5.10ml、5ml一次性注射器（如BectonDickinson）6.100mm直径培养皿（如Falcon）7.2个高压灭菌锅的锯齿状解剖镊（如Roboz）8.高压灭菌的不锈钢网：将40目的不锈钢网剪成5cm×5cm的小...

肿瘤是细胞在各种致瘤因素的作用下，基因发生改变，失去对其生长的正常调控，导致细胞异常增生。恶性肿瘤又称为癌症（cancer），是目前危害人类健康zui严重的一类疾病。我国城市地区居民死因*位为恶性肿瘤。肿瘤细胞在很多生物学特性上不同于正常细胞，也有别于修复性增生的细胞，具有明显的去分化现象。一、肿瘤细胞的分化特征恶性肿瘤细胞的特征之一是分化程度低，表现为形态上的幼稚性，功能上的异常，细胞的多种表型（phenotype）又回到原始的胚胎细胞表型，即发生细胞的去分化现象。机体在致...

生物、药物等许多的研究均需要通过观察细胞体积的变化或细胞数目增减的来判断和评估实验的效果。由于细胞所处环境的改变可促使其自身体积做出相应的变化，以便适应改变后的环境大致新的平衡。由于并不能清晰地知道该种细胞体积变化规律，因此必须检测其体积或细胞数目随条件、时间的变化。细胞的发育与细胞分裂周期级数递增均需要连续不断的细胞增殖。在培养液中正在增殖的细胞在其分裂前其体积将增大至原体积的两倍。然而对细胞发育与分裂的速度作如何调整才能保证细胞体积的不变并不明确。因此，测量细胞的体积的变...

二、实验原理细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合，是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。在形态上可见凋亡细胞与周围细胞脱离接触，细胞变园，细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈团块状或新月状分布、内质网和细胞膜进一步融合将细胞分成多个完整包裹的凋亡小体，凋亡小体zui后被吞噬...

（一）原理混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数T细胞则通过尼龙毛柱，这是获得富含T细胞群的有效方法。（二）材料及试剂1．尼龙毛（FemwallLaboratories,LP－1LeukoqakleukocyteFilters）。2．烧杯、铝箔、漏斗、一次性手套等。3．装填尼龙毛柱，一次性注射器。4．取自然沉降的上层血浆，过聚蔗糖—泛影葡胺分层液后，获取的血浆和分层液之间的单个核细胞层。（三）操作方法1．尼龙毛...