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ELISA试剂盒分类操作过程

2019-06-04 [1362]

1. ELISA试剂盒白介素类可于白色布景上,直接用肉眼查询效果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+"、“-"号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
2. 加酶标抗体:于各反应孔中,参与新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗刷。
3. 加底物液显色:于各反应孔中参与临时制作的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
4. 停止反应:于各反应孔中参与2M硫酸0.05ml。
5. 效果判定:可于白色布景上,直接用肉眼查询效果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+"、“-"号表示。也可测OD值:ELISA试剂盒白介素类检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。1.ELISA试剂盒白介素类用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过液。次日洗刷3次。
6. 加一定稀释的待检样品(不知道抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗刷。(一同做空白、阴性及阳性孔对照)
7. 于反应孔中,参与新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗刷,zui后一遍用DDW洗刷。
8. 于各反应孔中参与临时制作的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟
9. 于各反应孔中参与2M硫酸0.05ml