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在ELISA实验前的留意事项

2019-07-12 [1206]

ELISA实验时,留意事项如下:
正式实验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制实验条件,待检样品应作一式二份,以确保实验结果的准确性。有时本底较高,阐明有非特异性反响,可选用羊血清、兔血清或BSA等关闭。
在ELISA中,进行各项实验条件的挑选是很重要的
实验其中包括:
1)固相载体的挑选:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行挑选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反响,调查其显色反响是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
2)包被抗体(或抗原)的挑选:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多选用4℃18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它实验条件相同时,调查阳性标本的OD值。挑选OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。关于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
仔细阅读阐明书
1.确认试剂盒在有效期内
2.按阐明书确认一切试剂*(数量、体积)
3.标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,留意低温保存
4.准备好一切实验额定所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等
5.依据检测标本数量确认所需试剂的量
6.按阐明书将所用试剂平衡至室温,制造所需试剂
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