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介绍ELISA试剂盒组份和操作过程
点击次数:357      发布时间:2019-09-30

ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物等

完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:

1.已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)

2.酶符号的抗原或抗体(结合物);

3.酶的底物;

4.阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考规范品和操控血清(定量测定中);

5.结合物及标本的稀释液;

6.洗刷液

7.酶反响停止液。
 
ELISA试剂盒操作步骤:

1. 加规范品:在酶标包被板上设规范品孔,顺次参加不同浓度的规范品50ul(建议每个浓度做2个平行孔)

2. 加样:别离设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl,然后再加样品亲和素10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄悄晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液:将30倍浓缩洗刷液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5. 洗刷:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗刷液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:除空白孔外每孔参加酶标试剂50μl。

7. 温育:操作同3。

8. 洗刷:操作同5。

9. 显色:每孔先参加显色剂A50μl,再参加显色剂B50μl,悄悄震动混匀,37℃避光显色15分钟.

10. 停止:ELISA试剂盒每孔加停止液50μl,停止反响(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加停止液后15分钟以内进行。

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