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如何正确提取胎牛血清白蛋白
点击次数:80      发布时间:2021-01-29

胎牛血清白蛋白(BSA),又称第五组分,是牛血清中的一种白蛋白,包含583个氨基酸残基,分子量为66.430 kDa,等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用,例如在western blot中作为Blocking agent;在酶切反应缓冲液中加入BSA,通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附,能减轻有些酶的变性,能减轻有些不利环境因素如加热,表面张力及化学因素引起的变性。是胎牛血清中的一种球蛋白,一般获取胎牛血清白蛋白,常常运用的方法是加热法。

下面一起来看看是怎样获取胎牛血清白蛋白的!

一、所需材料

胎牛血清以柠檬酸三钠为抗凝剂,血液搜集后随即分别出血浆备用。需要的试剂有血清白蛋白;溴jia酚氯;醋酸纤维素薄膜,别的试剂均为分析纯。获取胎牛血清白蛋白需要准备 LG-6型大容量冷冻离心机,DF-C型电泳仪,UV-754型紫外可见分光光度计,PHS-2型酸度计。

二、具体方法

白蛋白含量测定 选用溴jia酚氯法,以胎牛血清白蛋白为规范. 白蛋白纯度的测定 选用醋酸纤维素薄膜电泳法。吸光度值的测定 用分光光度计直接测定蛋白质溶液在波长为403 nm处的光吸收值,然后折算成浓度为10 g/L时牛血清白蛋白的光吸收值,用A403表明。

牛血清白蛋白的生产工艺 新鲜抗凝牛血用LC-6型大容量离心机(3 000 r/min×30 min)离心分别出血浆,加一定量的蒸馏水稀释,再参与恰当的稳定剂和蛋白沉淀剂,然后按下述方法进行试验处理:

1.不一样pH值溶液对白蛋白的收率和质量的影响 在其它条件固定的情况下,试验不一样pH值对白蛋白的收率、纯度及A403值的影响。

2.不一样加热保温时间对白蛋白的收率和质量的影响 在选定的pH值和其它条件固定的情况下,试验不一样加热保温时间对白蛋白的收率、纯度及A403值的影响。

3.不一样稀释倍数对白蛋白的收率和质量的影响 在选定的pH值和保温时间及其它条件固定的情况下,试验不一样稀释倍数对白蛋白的收率、纯度及A403值的影响。

4.不一样加热温度对白蛋白的收率和质量的影响 在其它条件选定的情况下,试验不一样加热温度对白蛋白的收率、纯度及A403值的影响。

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