如何生成更可靠的免疫ELISA表型数据

ELISA数据中虽然 表面 CD分子仍是用于免疫表型的常用的标记 ，但常规平行检测 的CD分子却有所增加。研究者把其它细胞表面 的蛋白和细胞内标记 物加入到免疫表型分析 中，已经成为标准做法 。因为这些进展不可避免地使得 研究设计更加具有挑战性，我们咨询了一组专家来帮助您生成更可靠的免疫表型数据 。

研究免疫表型 时，其复杂性是不同 的。

从基础研究到临床监测 ，研究者 对这些 细胞 进行 免疫 表型 分析 ，有很多原因 。 Sartorius细胞 分析测试 开发 经理 MarkCarter指出 ，免疫表型研究的范围 从识别单一表型到复杂的多参数应用 ，比如 识别 从HIV 患者的血液样本中提取 CD4+T细胞 。 他说 ：“在试剂 、仪器 和软件 方面 的进步 使得 免疫 表型 研究 更为 复杂 。" 例如 ，现在可以对分化 细胞进行质量控制 ；描述 癌症 及其 治疗 反应 ；研究 疾病 对病人 免疫系统 的影响 ；或者 为器官捐赠的捐献者 和接受者进行 免疫 配对 。

用到 的标记 的数量和类型决定了免疫 表型 的目的 。 CellSignalingTechnology高级 开发 科学家 SarahKlein博士指出 ：“流式细胞术免疫 表型分析的阅读次数少为两次 ，因为你 总是 想将细胞 活性 的标记 与你选择 的标记结合起来 .“有些 实验室在有特殊问题 要问时会 做3-5个标记 免疫表型分析 ，而另一些 实验室 通常 在多个 平台 上使用 10 -15 个标签组合 。 大数量的标记只是生物信息学 平台 的局限性 ，包括检测技术 、可获得 的抗体 和分析 大型 面板 提供 的大量数据 。

Bio -Rad流式细胞 学现场 营销专家 MikeBlundell对此 表示 赞同 ，并指出 ，尽管可以单独使用一种标记 来识别特定类型 的细胞 (如T细胞 CD3或B细胞 CD19)，但是 确定 血液 中的一个普通谱系可能需要四个标记 ，并确定特定的谱系组合 ，就可以把这一 数字 增加 到八个 。 他说：“监控 激活状态 、记忆 状态 和多个 子集 的谱系 通常 需要 超过20个标记 。 比如，即使 只看T细胞亚群，你通常也想要确定样品中其他类型的细胞 ，以确保他们不会受到影响 ，或者从你的分析中去除这些细胞 。

在面板中可以包含的标签 越多，需要用到的样本 就越少 ，"MichelleM.Poulin博士解释道。Fluidigm质谱流式细胞术领域应用的高级经理。研究者们用质谱流式细胞学技术来进行免疫表型分析，通常会将超过30到40个标记结合在一起 。