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人(Human)α-生育酚 (α-Tocopherol)ELISA检测试剂盒使用说明
点击次数:1673      发布时间:2013-07-26

中文说明书 UNIONHONEST
酶联免疫吸附测试 Enzyme Linked Immunosorbent Assay
人 (Human) α-生育酚 (α-Tocopherol) ELISA 检测试剂盒
本试剂仅供研究使用 标本:血清或血浆
试验原理:

α-Tocopherol试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知α-Tocopherol浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将α-Tocopherol和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中α-Tocopherol的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制

试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制
96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型
塑料膜板盖1块半块即用型
标准品:800mg/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀稀
空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型
标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型
生物素标记的抗α-Tocopherol抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型
亲和链酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型
洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀释
底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
标本稀释液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型

自备材料
1.蒸馏水。
2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3.振荡器及磁力搅拌器等。

安全性
1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,2.请尽快用水冲洗。
3.实验中不4.要吃喝、抽烟或使用化妆品。
5.不6.要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

ELISA 检测试剂盒操作注意事项
1.试剂应按标2.签说明书储存,3.使用前恢复4.到室温。稀稀过后的标5.准品应丢弃,6.不7.可保存。
8.实验中不9.用的板条应立即放回包装袋中,10.密封保存,11.以免变质。
12.不13.用的其它试剂应包装好或盖好。不同14.批号的试剂不15.要混用。保质前使用。
16.使用一次性的吸头以免交叉污染,17.吸取终止液和底物A、B液时,18.避免使用带金属部分的加样器。
19.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
20.洗涤酶标21.板时应充分拍干,22.不23.要将吸水纸直接放入酶标24.反应孔中吸水。
25.底物A应挥发,26.避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,27.避免长时间暴露于光下。避免用手接触,28.有毒。实验完成后应立即读取OD值。
29.加入试剂的顺序应一致,30.以保证所有反应板孔温育的时间一样。
31.按照说明书中标32.明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法
1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不2、含热原和内毒素的试管。收集血液后,3、1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
4、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
5、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
6、组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,7、取上清液
8、保存------如果样品不9、立即使用,10、应将其分成小部分-70 ℃保存,11、避免反复12、冷冻。尽可能的不13、要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,14、检测前先离心或过滤。不15、要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备
1.标2.准品:标3.准品的系列稀释应在实验时准备,4.不5.能储存。稀释前将标6.准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:

800 mg/ml(6号标准品)原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
400 mg/ml(5号标准品)100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
200 mg/ml(4号标准品)100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
100 mg/ml(3号标准品)100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
50 mg/ml(2号标准品)100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
25 mg/ml(1号标准品)100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 mg/ml(空白对照)原始浓度不用稀释直接加入50ul。

7.洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍8.稀释。


操作步骤
1.使用前,2.将所有试剂充分混匀。不3.要使液体产生大量的泡沫,4.以免加样时加入大量的气泡,5.产生加样上的误差。
6.根据待测样品数量加上标7.准品的数量决定所需的板条数。每个标8.准品和空白孔建议做复9.孔。每个样品根据自己的数量来定,10.能使用复11.孔的尽量做复12.孔。标13.本用标14.本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
15.加入稀释好后的标16.准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标17.记的抗体。盖上膜板,18.轻轻振荡混匀,19.37℃温育1小时。
20.甩去孔内液体,21.每孔加满洗涤液,22.振荡30秒,23.甩去洗涤液,24.用吸水纸拍干。重复25.此操作3次。如果用洗板机洗涤,26.洗涤次数增加一次。
27.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,28.轻轻振荡混匀,29.37℃温育30分钟。
30.甩去孔内液体,31.每孔加满洗涤液,32.振荡30秒,33.甩去洗涤液,34.用吸水纸拍干。重复35.此操作3次。如果用洗板机洗涤,36.洗涤次数增加一次。
37.每孔加入底物A、B各50ul,38.轻轻振荡混匀,39.37℃温育10分钟。避免光照。
40.取出酶标41.板,42.迅速加入50ul终止液,43.加入终止液后应立即测定结果。
44.在450nm波长处测定各孔的OD值。

建议使用的实验方案

标准品浓度(mg/ml)
A800800样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
B400400样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
C200200样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
D100100样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
E5050样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
F2525样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品


局限
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到的结果。

试剂盒性能
1. 灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性:不与其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。

ELISA 检测试剂盒结 果 判 断 与 分 析
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的α-Tocopherol标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的α-Tocopherol含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围:0-800mg/ml

4、敏感度: 1.0 mg/ml 

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