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2015年关于人ELISA试剂盒质量管理--仪器质控研究

2015-03-11 [2073]

为使仪器保持*工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序(SOP),所要控制的仪器包括移液器(加样枪),水浴箱(温箱),洗板机和酶标仪。
    ◎移液器:ELISA加样量小(5-100ul),其准确性直接影响实验结果,利用称重法检查:吸取刻度指示量的水,万分之一天平称重后计算吸量是否准确,一般应在±10%以内;
◎水浴箱 经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中(或温箱内)实测温度是否一致,人ELISA试剂盒允许有±1℃的误差;
    ◎洗板机 每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul ,人工扣板时,垫纸不湿,定期检查管孔是否堵塞;
◎酶标仪 经常维护其光学部分,防止滤光片霉变,人ELISA试剂盒定期检测校正,使其保持良好的工作性能。

附1:酶标仪校正程序
◎滤光片波长精度检查:将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下,用UV-2201型紫外-可见分光光度计(波长精度±0.3nm)于可见光区对每个滤光片进行扫描,其检测值与标定值之差为滤光片波长精度。
◎通噵差与孔间差检测:通道差检测是取一只酶标板小孔杯(杯底须光滑,透明,无污染以酶标板架作载体, 将其(内含200ul甲基橙溶液吸光度调至0.500A左右)置于8个通道的相应位置,蒸溜水调零,1于490nm处连续测三次,观察其不同通道的检测器测量结果的一致性,可用极差值来表示。孔间差的测量是选择同一厂家,同一批号酶标2板条(8条共96孔)分别加入200ul甲基橙溶液(吸光度调至0.100A左右)先后置于同一通道,蒸溜水调零,于490nm处检测,其误差大小用±1.96s衡量。
n 零点飘移(稳定性观察):取8只小孔杯分别置于8个通道的相应位置,均加入200ul蒸溜水并调零,于490nm处每隔30分钟测一次,观察各个通道4小时内吸光度的变化。

◎精密度评价:每个通道3只小杯分别加入200ul高中低3种不同.浓度的甲基橙溶解,蒸溜水调零,于490nm作双份平行测定,每日测二次(上下午各一次),连续测定20天。分别计算其批内精密度,日内批精密度,日间精密度和总精密度及相应的CV值。
◎线性测定:用电子天平称取甲基橙配制5个系列的溶液,于490nm平行测8次,取其均值。计算其回归方程,相关系数及标准估计误差s,并用±1.96s表示样品测量的误差范围.人ELISA试剂盒双波长测定评价:取一分甲基橙溶液,分别加入3种不同浓度的溶血液(测定波长为490nm,校正波长为585nm),先后于8个通道检测,每个通道测3次,比较各组之间是否具有统计学差异,以考察双波长消除干扰组分的效果。
◎一般酶标仪无585nm滤光片,可选用550nm或630nm滤光片。450nm 滤光片的检定选用普鲁兰溶液(校正波长为630nm)。