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人ELISA试剂盒的解决的办法
点击次数:1305      发布时间:2015-08-13

    因此有些厂家为了保持较好的本底采用了单片段基因工程抗原及合成肽包被,该类试剂盒的流行病学敏感度不够,人们往往以反应本底的好坏来衡量人ELISA试剂盒反应试剂盒,稳定性也成问题。值得欣慰的是也有厂家坚持试剂盒高的流行病学敏感度,科学得对待反应结果。本文就标本因素对人ELISA试剂盒测定的影响做如下讨论。
    血清是zui常用的人ELISA试剂盒标本,血浆一般可视为与血清同等的标本,标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致,分为内源性物质和外源性物质两种:
1. 内源性物质 有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质,可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有:类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。
(1)类风湿因子
人血清中IgM、IgG型类风湿因子(RF)可以与人ELISA试剂盒系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合,从而导致假阳性。
解决该情况的办法是:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②标本用联有热变性(63℃,10 min)IgG的固相吸附剂处理(将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效);③检测抗原时,可以用2-巯基乙醇等加入到标本稀释液中,使RF降解。
(2)补体 ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中,人ELISA试剂盒抗体分子发生变构,其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来,使C1q 可以将二者连接起来,人ELISA试剂盒从而造成假阳性。解决的办法是:①用EDTA稀释标本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加热血清使C1q灭活。
(3)嗜异性抗体 人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig (s) 结合的天然嗜异性抗体,可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来,也能造成假阳性。解决的办法是:可在标本稀释液中加入过量的动物Ig (s) ,但加入量不足或亚类不同时无效。
(4)嗜靶抗原的自身抗体 抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体,有时能与靶抗原结合形成复合物,在人ELISA试剂盒方法中均可干扰抗原抗体测定结果。为避免以上情况出现,测定前需用理化方法将其解离后再测定。

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