人血管内皮生长因子 （VEGF）酶联免疫分析

人ELISA试剂盒使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中血管内皮生长因子 （VEGF）含量。实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血管内皮生长因子 （VEGF）水平。用纯化的人血管内皮生长因子 （VEGF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血管内皮生长因子 （VEGF），再与 HRP标记的血管内皮生长因子 （VEGF）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB显色。 TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的。颜色的深浅和样品中的血管内皮生长因子 （VEGF）呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（ OD值），通过标准曲线计算样品中人血管内皮生长因子 （VEGF）浓度。试剂盒组成

1
30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶
7
终止液 6ml×1瓶
2
酶标试剂 6ml×1瓶
8
标准品（2400pg/ml） 0.5ml×1瓶
3
酶标包被板 12孔 × 8条
9
标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4
样品稀释液 6ml×1瓶
10
说明书 1份
5
显色剂 A液 6ml×1瓶
11
封板膜 2张
6
显色剂 B液 6ml×1/瓶
12
密封袋 1个

人ELISA试剂盒标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样品zui终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 3 0分钟。
4.配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀， 37℃避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转）。
11.测定：以空白空调零， 450nm波长依序测量各孔的吸光度（ OD值）。测定应在加终止