上海研域生物推出人原代细胞特惠活动

七月的人间，是独属于夏日的浪漫与丰盈。晨光破晓，拂晓的微光漫过街巷，驱散晨起的慵懒；烈日灼灼，铺就满目滚烫的人间烟火；晚风徐徐，裹挟着草木清香与荷塘荷韵，抚平白日所有的燥热与疲惫。蝉鸣阵阵，蛙声片片，绿荫灼灼，繁花盛放，世间万物都在肆意生长、热烈绽放，不负时光，不负盛夏。为了感谢客户长期以来对本公司的支撑与信任，我司人原代细胞9.6折福利大放送。时间有限，广大客户不要错过哦, 详情请往下看！

活动内容：

凡在活动期间购买本公司人原代细胞的客户，享受9.6折优惠。

活动时间：

2026年7月6日- 2026年7月13日 。

注：本次活动解释权终归我公司所有。

人原代细胞注意事项：

一、取材与组织运输（源头决定存活率）

1. 新鲜度红线

组织离体后4–6 h内完成消化接种；无法即时处理则4℃冷藏运输，严禁室温久放、冷冻组织。

2. 样本预处理

- 动物组织：碘伏+75%酒精逐层消毒皮肤，三套器械分开（解剖/分离/剪碎），避免皮肤杂菌带入；剔除脂肪、坏死发白组织 。

- 临床标本：仅取病灶周边正常组织，减少缺血损伤。

3. 运输保存液配方

DMEM/F12 + 10%BSA + 2×双抗（青霉素1000 U/mL+链霉素1 mg/mL）；污染风险高样本加两性霉素B防真菌。

二、组织消化解离（控损伤、保活率）

1. 酶选择区分

1) 胰酶（0.25%胰-EDTA）：解离上皮，作用强、损伤大，消化时间严格控制2–5 min；

2) 胶原酶Ⅰ/Ⅱ/Ⅳ：间质、血管、肝、脂肪组织专用，温和，消化30–90 min；

禁止长时间单酶消化，易致细胞膜破损、大量凋亡。

2. 终止消化必须到位

4倍体积含血清培养基中和胰酶；胶原酶可搭配EDTA抑制活性。

3. 过滤纯化

消化悬液过40 μm细胞筛去除组织团块；低速离心300 g ×5 min，弃上层碎片，减少死细胞杂质。

4. 防凋亡加分项

解离体系可加ROCK抑制剂Y-27632，显著降低单细胞应激凋亡。

三、培养体系与铺板接种

1. 培养基与血清

- 必须用热灭活特级胎牛血清（56℃ 30 min），禁用小牛血清；基础培养基优先DMEM/F12，搭配细胞专用添加物（B27、HGF、EGF等）。

- 短期分离可加双抗，长期扩增/功能实验去掉抗生素，避免改变细胞表型。

2. 包被耗材（绝大多数原代必需） 

内皮、神经、上皮、干细胞：培养皿提前用明胶、多聚赖氨酸、层粘连蛋白包被，37℃孵育2 h，增强贴壁，防止漂浮凋亡。

3. 接种密度（高于细胞系）

原代增殖慢、接触抑制强，低密度极易老化：

1)常规细胞：1×10⁴–5×10⁴ 活细胞/cm²；

2) 神经元、心肌细胞等高敏感细胞：加倍密度接种。

4. 培养环境

37℃、5% CO₂、饱和湿度；严禁频繁开关培养箱，温度/CO₂波动会批量死亡。

5. 换液规则

1) 接种后24 h第一次换液，去除未贴壁死细胞、组织碎片；

2) 后续2–3天全换液，培养基变黄立刻更换，原代不耐受酸性环境。

四、传代操作（最容易损伤细胞）

1. 传代时机

汇合度70%–85%即可传代，不要长满100%，高密度快速老化、分化失活；原代仅P0–P3适合实验，P4后功能大幅衰减。

2. 消化严控

PBS轻柔洗2次去除血清（血清抑制胰酶）；加少量胰酶，镜下观察细胞变圆、间隙拉开立刻弃胰酶，不要吹打脱落再终止。

3. 吹打轻柔

避免强力高压吹打产生气泡损伤细胞膜；吹打次数控制10–15次，减少机械剪切。

4. 分瓶比例

1:2 或 1:3分瓶，不可1:4及以上稀释，低密度极易停止增殖。

五、冻存与复苏（慢冻速融，核心原则）

冻存（慢冻，减少冰晶）

1. 选用对数生长期P0/P1健康细胞，汇合度70%左右；

2. 冻存液优选：90%特级FBS +10% DMSO（无血清细胞用商品化无血清冻存液）；DMSO缓慢滴加，放热会杀伤细胞；

3. 细胞密度：1–2×10⁶ 活细胞/mL；

4. 降温程序：程序降温盒-80℃过夜，次日转入液氮气相（≤-130℃），禁止长期放-80℃。

复苏（速融，降低DMSO毒性）

1. 液氮取出冻存管，37℃水浴1 min快速融化，仅留微小冰芯；

2. 75%乙醇擦拭管壁消毒；

3. 两种方案选其一：

① 低损伤法：直接铺板，24 h后换液去除DMSO（适合极脆弱原代如神经元）；

② 常规法：悬液加入10倍预热培养基，300 g离心5 min，弃上清重悬铺板；

4. 复苏活率合格标准≥85%；复苏一代稳定后再做功能实验，消除冻存应激损伤。

六、无菌与污染防控（原代污染几乎无法挽救）

1. 常规无菌规范

超净台提前紫外30 min；全程口罩手套，不跨臂操作；耗材全部无内毒素级，移液枪头一用一换。 

2. 三类致命污染识别与处理

1. 细菌：培养基快速变黄浑浊，镜下大量游动细沙颗粒；原代耐受极差，污染直接整瓶丢弃，不可挽救。

2. 霉菌/真菌：液面白色絮状菌丝；孢子扩散快，污染后整箱细胞风险高，全部丢弃并消毒超净台、培养箱。

3. 支原体（隐形杀手）

培养基无明显变化，但细胞增殖变慢、形态皱缩、凋亡增多；常规双抗无效，会改变基因/蛋白表达；

预防：血清提前支原体检测，定期全细胞筛查；污染细胞直接丢弃，不要继续实验。

3. 交叉污染

不同组织、不同批次原代分开操作，操作台分区；移液管不混用，防止成纤维细胞过度杂生。

七、通用禁忌（高频踩坑点）

1. 组织室温放置过夜、冷冻保存；

2. 胰酶长时间消化、强力吹打、气泡冲击细胞；

3.  普通塑料皿不包被直接培养神经/内皮细胞；

4. 长满100%才传代、超高稀释分瓶；

5.  P4及以后细胞用于药物、分泌、免疫功能实验；

6. 长期添加双抗持续培养；

7.  复苏后直接做实验，不等待贴壁恢复；

8. -80℃长期储存原代冻存细胞（超过1周活性暴跌）。

八、实验使用建议

所有功能、给药、转染、染色实验，统一使用P1–P3代原代；每次实验前镜检形态，出现空泡、大量漂浮死细胞、形态异常则弃用，避免数据失真。

研域（上海）化学试剂有限公司总部设在上海，公司专业经营生命科学领域的研究试剂、实验室消耗品等，我们致力于向国内外生命科学研究人员提供的产品和技术服务。