ELISA试剂盒法与金标层析法检测HIV抗体的适用性探讨

目前，检测HIV抗体常用的初筛方法有金标层析法和ELISA法。由于ELISA试剂盒法实验时间较长，对设备、工作环境、实验人员操作要求相对较高，因此中、小型以及偏远地区的实验室难以全面开展，而金标层析法具有操作简单、快速等优点已被很多医疗单位用来进行HIV抗体初筛。但在试剂的检测诊治当中，由于HIV抗体初筛结果与确认结果不符而引发的医疗纠纷时有发生，因此根据不同的医疗环境和单位选择合适的检测方法十分重要。本文对用两种方法检测HIV抗体初筛阳性的结果与确认结果进行分析比较，旨在探讨金标层析法与ELISA法检测HIV抗体在实际工作中的适用性，为合理选择实验方法提供理论基础。

1  资料与方法

    1.1  一般资料  

所有血液样本均来自医院2005年门诊和住院病人，共1208例，其中男648例，女560例，年龄0.5～90岁，平均39岁。用ELISA法和金标层析法同时检测其HIV抗体，所有样本均在采样后4h内检测完毕。

    1.2  方法

    1.2.1  金标层析法  采用双抗原夹心法原理，10～30min内观察结果。

1.2.2  ELISA法  利用双抗原夹心法，操作步骤严格按ELISA试剂盒说明书进行。

1.3   试剂  

两种方法均使用上海伊丽萨生物科技有限公司生产的试剂，该试剂经国家药检所批，批检合格，且都在有效期内（ELISA法试剂批号分别为：2005036601、2005056602、2004126608，金标层析法试剂批号分别为：2005040304、2005052501、2005011905）。

    1.4  仪器  洗板机Anth.s Fludo；酶标仪Anth.s 2010。

    1.5  统计学分析  检测结果采用χ2检验进行数据处理，以P<0.05为差异有显著性。

2  结果

    对两种方法检测结果进行分析比较， ELISA试剂盒与金标层析法检测HIV抗体的结果经统计显示差异无显著性（χ2=0.65；P>0.05）

3  讨论

    自1985年我国报道*例艾滋病以来［1］，艾滋病在我国的流行趋势日趋严峻，近几年更是进入一个快速增长期［2］。到目前为止，艾滋病尚无有效的治疗措施，因此，对可疑人群的检测和筛查显得尤为重要。

    近年，艾滋病的检测手段被不断更新和利用。自20世纪70年代，Fanlk等建立了ELISA技术后［3］，该技术便广泛用于临床免疫检测。用于检测艾滋病的ELISA法第三代试剂，采取双抗原夹心法原理，利用酶催化底物反应的放大作用［3］，用来提高特异性抗原抗体反应的敏感性。其特点为特异性和灵敏度高、准确性好。而金标层析法是继ELISA法之后发展起来的一种膜固相免疫测定，其以胶体金作为标记物，利用层析作用来检测抗原或抗体［4］。用于检测HIV抗体金标层析法现在已广泛使用于临床和各医疗机构。该方法操作简便、快速，无需特殊设备，通过实验检测结果发现，两种方法均有较高的灵敏度，金标法阳性的11例标本用ELISA法检测有4份标本阴性、7份标本阳性，但两者差异无显著性（P>0.05），均可适用于医学检测。然而在实际的临床试验中，选用HIV抗体初筛试剂时，应视不同情况而定。如本实验的检测结果中，11例金标法初筛阳性的样本，经省CDC确认7例为阳性，7例ELISA法检测阳性的样本经省CDC确认均为阳性。可见，ELISA法的特异性高于金标层析法，有较高的阳性预期值。而金标层析法存在较高的假阳性率，其产生的原因多数还不清楚，排除技术因素外，可能主要是因为金标法受实验条件和时间的限制，与ELISA试剂在制作技术上还存在一定的差异，还有一些针对HLA抗原的抗体、患者自身免疫性疾病、寄生虫、其他病毒以及高丙种球蛋白症病人的血清标本也常容易出现假阳性反应［1］。

    在医院就诊的过程中，因HIV-Ab初筛阳性而确认实验阴性导致的医疗纠纷时有发生。因患者不理解或医患之间沟通不够，势必给医院的医疗服务质量和医疗形象造成负面影响，也给受检者造成巨大的精神压力和恐慌心理。因此选用一种特异性高、有较高的阳性预期感、能zui大限度保证发现真正HIV感染者的试剂尤为重要，ELISA试剂即具有以上优点。所以大、中型医院在进行HIV-Ab初筛时，除急需手术或输血的病人用金标层析法外，其余标本应尽量采用ELISA试剂盒法，以降低假阳性率，减少医患纠纷，其他如进行艾滋病流行病学监测［1］，对特定人群HIV感染状况和发展趋势进行无关联和匿名调查与检测；对流行病学、临床、病毒学或HIV相关的研究对象进行自愿检测时也应该选择特异性高的ELISA试剂。金标试剂可能由于本身反应条件的限制，其质量还有待进一步提高，但该方法简便、快速、检测敏感度高、假阴性率低，可适合街头献血员筛选的大批量检测，经济合算，献血者也乐意接受，可使无偿献血的血液合格率得到明显提升，对提高血液质量、保障输血安全、减少血液浪费、进一步推广无偿献血工作起到了积极作用。金标试剂还具有易于保存（环境温度为2～30℃）、储存时间长（2年）、不浪费等诸多优点，对HIV-Ab检测标本zui少、不具备ELISA测定条件的偏远地区中、小型检验科也尤为适用。