酶联免疫试剂盒实验具体操作步骤和注意事项

酶联免疫试剂盒实验前准备：
1、使用前应将盒内各试剂取出，室温放置至少30分钟。
2、准备各种实验仪器及材料，如微量移液器，吸头，医用蒸馏水等。
3、浓缩洗液与医用蒸馏水1：19倍稀释后成为应用洗涤液。
4、浓缩样品稀释液与医用蒸馏水1：4倍稀释成应用样品稀释液。
5、用应用样品稀释液来稀释样品，按照1：100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中，充分混匀待用。
酶联免疫试剂盒操作步骤：
1、取出酶标板，设空白孔，依照次序对应分别加入100μl的标准品于空白微孔中（空白孔视为0号标准品，用医用蒸馏水替代）；
2、分别标记样品编号，加入100μl的稀释样品于空白微孔中（不同的样本采用不同的吸头）；
3、将酶标板置于37℃温育30分钟；
4、将酶标板板取出，将其中的液体甩去，每个孔中全部加满应用洗涤液后，立即甩去液体;
5、每个孔中加满应用洗涤液后，轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去，在吸水纸上将酶标板拍干；
6、重复第5个步骤5次，在吸水纸上将酶标板拍干；
7、在标准品孔和样品孔中加入100μl的酶标偶合溶液；
8、将96孔板置于37℃温育30分钟；
9、将酶标板取出，将其中的液体甩去，每个孔中全部加满应用洗涤液后，立即甩去液体；
10、每个孔中再次加满洗涤应用液后，室温轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去，在吸水纸上将酶标板拍干；
11、重复第5个步骤5次，在吸水纸上将酶标板拍干；
12、在每个孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。轻轻振荡混匀。（A液、B液采用不同的吸头加样）；
13、将酶标板置于37℃避光温育反应15分钟；
14、每个微孔中加入50μl的终止液，轻轻振荡混匀；
15、在酶标仪上，450nm处测定OD; 显色后，15分钟内进行测定；
16、根据制备的标准曲线，计算样本含量。
酶联免疫试剂盒注意事项：
1、此试剂为体外检测试剂，效期内使用，试剂应视为传染物，不同总批号的试剂不能混用。
2、使用前应将盒内各试剂取出。室温放置至少30分钟，
3、浓缩洗涤液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟。
4、浓缩样品稀释液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟
5、若24小时内进行实验，标本可存放于2～8℃。不需及时实验，标本-20℃保存，避免反复冻融。
6、在反复清洗微孔板，并扣干微孔中的残余液体，否则将降低度，造成吸光度偏离的假像。
7、加样完毕后，应注意轻微摇动微孔反应条，以便使孔中的液体充分混匀。
8、试剂盒保存于2～8℃，请勿冷冻，有效期请见盒内标示。