ELISA试剂盒影响基因表达的因素有哪些？

选择一种恰当的质粒是影响基因表达的关键因素。请看ELISA试剂盒尝试利用10种不同的质粒构建成的融合质粒表达相同的虫荧光素酶报告基因，这10种融合质粒表达出的虫荧光素酶基因的表达水平各异。ELISA试剂盒告诉您影响基因表达的质粒因素。虫荧光素酶报告基因表达水平依赖于空载质粒的类型。以上是虫荧光素酶报告基因在THP1和HUVEC细胞中在4小时、24小时和48小时中的表达水平。在THP1细胞中，质粒DNA的量为0.3-0.5μg。HUVEC细胞中质粒DNA的量为2.5-4.4μg。
启动子的类型是否适用于现在的细胞类型？ELISA试剂盒展示了在不同的细胞类型中启动子的强度时不同的。尽管CMV在大多数哺乳动物细胞中属于较强的启动子，但是另外的启动子可能会在我们研究的这种细胞中有较强的表达(例如BHK-21细胞中SV40启动子)。
内含子
的基因表达需要基本的内含子的剪切，然而这个观点并不是总被大家认可。内含子的位置和强度会影响转录、mRNA的输出和聚腺苷酸化。这样，依赖于内含子的位置，内含子甚至会导致基因表达的降解。
IRES(内部核糖体进入位点)
内核糖体剪切位点质粒，启动子驱动两种基因的表达，一个是感兴趣的克隆基因(经常是处在上游基因)，另一个是报告基因，通常编码GFP蛋白。IRES质粒表达的mRNA是双顺反子信使，意味着两个基因都在相同的mRNA分子上。两种基因的双顺反子数量是一样的，但是两种基因的翻译起始水平存在很大的不同。核糖体结合上游基因的起始位点是相当有效的，然而IRES却会让核糖体与下游基因的结合和翻译处于一个较低的水平。下游基因通常是GFP，因此GFP的表达水平就会低于没有IRES序列的质粒表达。而通常没有IRES序列的GFP质粒的表达水平我们认为是正常的。可以通过构建两种基因的融合质粒或者共转染实现表达相同数量的感兴趣的蛋白和GFP蛋白。
LTR(病毒长的末端重复)
许多质粒的表达利用逆转录病毒的LTR的启动子和增强子，然而当这些质粒被转染进入特定类型的细胞中时，可能会受到这些细胞对于其表达的抑制。尽管这种抑制机制未*阐明，很有可能是因为来自于逆转录病毒的启动子或者增强子在某些原代细胞或者细胞系中不能很好的工作。*的解决办法就是利用传统的启动子例如CMV(e.g.,pmaxCloning Vector),EF1a或者SV-40将基因重新克隆至新的载体上。
ELISA试剂盒质粒的大小在实验室中我们通常会使用4-7kb的质粒，而Lonza的Nucleofection可以转染长至20kb的质粒。若是更长的质粒可能会导致转染效率的降低。通常的规则是，质粒长度越长，越难进入到细胞内。这个规则适用于电穿孔的方法以及脂质体介导的方法。